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復雜植物總RNA提取試劑注意事項
發布時間:2022-06-13 點擊量:122


復雜植物總RNA提取試劑說明書

 

RNApurePlantPlusReagent

復雜植物總RNA提取試劑



Cat.No.  K0537 

保存:    2-8

 

組分說明

 

Cat.No.                     K0537        K0537A

 

復雜植物總RNA 提取試劑    16ml        80ml

 

產品簡介

 

     本試劑可從植物組織、特別是富含多酚或淀粉的植物組織(如甘蔗、馬鈴薯塊莖、松針、蘋果、香蕉、山藥等)中,提取總 RNA,操作方便、快捷。每 100ml(加入β-巰基乙醇后的終體積)可處理 100mg 組織 200 次,處理 5g 組織 4次。由本試劑提取的 RNA 純度高,可直接應用于下游實驗,如 cDNA 合成、RT-PCRReal-timeRT-PCRNorthernBlot

DotBlot、體外翻譯等。

 

注意事項

 

1.  預防RNase污染,應注意以下幾方面:

    1)使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

    2)玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘,用水徹底沖洗后高壓滅菌。

    3)配制溶液應使用無RNase的水。

    4)操作人員戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。

2.  提取的樣品避免反復凍融,否則影響RNA提取得率和質量。

3.  復雜植物總RNA提取試劑在使用前請加入β-巰基乙醇,將β-巰基乙醇與復雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合,加 入β-巰基乙醇后的復雜植物總RNA提取試劑可在4℃保存1個月。

4.  本品中含有苯酚,具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會導致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時應穿戴防護物品,如防護服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛,應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。

5.  保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀,2-8℃可以保存一周,-20℃條件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比較短,容易降解,

    建議提取后盡快進行后續實驗,如反轉錄成 cDNANorthernBlot 等。

6.  若下游實驗對 DNA 非常敏感,建議用不含 RNase DNaseI(貨號:YJ2090)對 RNA 進行處理。

自備試劑:β-巰基乙醇、5MNaCl、氯仿、異丙醇、75%乙醇、無RNase的水

操作步驟

小量樣本提取步驟:

1.   取不多于100mg的新鮮植物組織在液氮中充分研磨,將研磨后的粉末收集到離心管(自備)中。

2.   加入500 μl 復雜植物總RNA抽提試劑(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇,β-巰基乙醇與復雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合),反復吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘,使蛋白核酸復合物完全分離。

3.   4 12,000rpm離心1分鐘,將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管(自備)中。

4.   在得到的水相溶液中加入100μl5MNaCl,混勻。

5.   加入300μl 氯仿,上下顛倒充分混勻。

6.   4 12,000rpm離心10分鐘,將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管(自備)中。注意:若提取的植物組織中富含多糖多酚,可重復步驟56一次。

7.   加入等體積的異丙醇,混勻,室溫放置10分鐘。

8.   4 12,000rpm離心10分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄RNA沉淀。

9.   加入1ml75%乙醇,4 5,000rpm離心3分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄沉淀。

     注意:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。

10.  室溫放置2-3分鐘,晾干。加入30-50μl RNase的水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。

     注意:沉淀不要過分干燥,以免難于溶解。

大量樣本提取步驟:

1.   1g的新鮮植物組織在液氮中充分研磨,將研磨后的粉末收集到離心管(自備)中。

2.   加入5ml 復雜植物總RNA抽提試劑(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇,β-巰基乙醇與復雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合),反復吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘,使蛋白核酸復合物完全分離。

3.   4 10,000rpm離心1分鐘,將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管(自備)中。

4.   10ml 上清水相溶液中加入2ml5MNaCl,混勻。

5.   10ml 上清水相溶液中加入6ml 氯仿,上下顛倒混勻。

6.   4 10,000rpm離心15分鐘,將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管(自備)中。

    注意:若提取的植物組織中富含多糖多酚,可重復步驟56一次。

7.   加入0.9倍體積的異丙醇,混勻,室溫放置10分鐘。

8.   4 10,000rpm離心15分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄RNA沉淀。

9.   加入5-10ml75%乙醇,4 5,000rpm離心5分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄沉淀。

注意:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。

10.  室溫放置2-3分鐘,晾干。加入200μl RNase的水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。

注意:沉淀不要過分干燥,以免難于溶解。

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